Objectivo:
- Isolar DNA de células.
Material:
- Quiwi, cebola, banana, fígado - Funil
- 10 mL de detergente de loiça - Dois tubos de ensaio
- 1 Colher de chá - Pipeta
- 70 mL de água destilada - Vareta
- Ácido clorídrico normal à temperatura ambiente - Almofariz
- Reagente de Schiff (fucsina descorada)
Procedimento Experimental:
1. Descasque e corte o quiwi (ou outro material biológico) em pequenos fragmentos e coloque-os no almofariz.
2. Deite o sal e o detergente num gobelé com água destilada. Agite suavemente a mistura.
3. Coloque a mistura obtida no almofariz e triture.
4. Filtre, sucessivamente, o produto obtido através de papel de filtro e de algodão hidrófilo.
5. Faça escorrer, lentamente, álcool refrigerado em quantidade aproximadamente igual à do filtrado ao longo da parede da proveta. Espere algum tempo e procure observar a formação de duas fases: uma superior, alcoólica, e outra inferior, aquosa.
6. O DNA, insolúvel no álcool, precipita e forma uma massa filamentosa, esbranquiçada, que contém proteínas e outros materiais.
7. Para a coloração, pode utilizar a técnica de Feulgen:
- Coloque o precipitado na água destilada (10s);
- Mergulhe-o em ácido clorídrico normal (15s);
- Passe novamente o material por água destilada (10s);
- Mergulhe o precipitado no reagente de Schiff (3 min.);
Etapas de Extracção
Destruir as membranas para libertar o DNA.
Separar o DNA do resto dos constituintes da célula.
3. Fazer precipitar o DNA com o fim de o observar.
4. Por coloração, testar a presença do DNA.
Princípios
A. O papel de filtro retém alguns constituintes maiores e deixa passar o DNA (bem como as proteínas).
B. A fucsina retoma a cor vermelha em contacto com o DNA.
C. O detergente intervém na desorganização das membranas.
D. O álcool permite desidratar as moléculas de DNA que se aglutinam, tornando-se visível.
· Utilizando os dados da tabela, procure estabelecer relações entre as etapas de extracção e os princípios que as fundamentam.
Discussão:
Com base nas observações efectuadas discuta os seguintes tópicos:
1. Onde se encontra o DNA na célula?
2. Qual a função dos reagentes usados na experiência (sal, detergente, álcool)?
3. Porque motivo não se pode ver a dupla hélice que constitui a molécula de DNA?